fa طراحی و ساخت کنترل داخلی جهت تشخیص یرسینیا پستیس بوسیله PCR عمومى General پژوهشي Research <p dir="RTL"></p> <p dir="RTL"><strong>زمینه:</strong> یرسینیا پستیس، عامل طاعون، باکتری گرم منفی، غیر متحرک و کند رشد متعلق به خانواده انتروباکتریاسه می<span dir="LTR">‌</span>باشد. بر اساس طبقه<span dir="LTR">‌</span>بندی <span dir="LTR">CDC</span> این باکتری به دلیل نرخ بالای مرگ و میر و انتقال آسان انسان به انسان در دسته <span dir="LTR">A</span> عوامل بیوتروریسمی قرار گرفته است. علی<span dir="LTR">‌</span>الرغم حساسیت و دقت بالای <span dir="LTR">PCR</span>، ممکن است نتایج منفی کاذب به علت وجود مهارکننده موجود در نمونه<span dir="LTR">‌</span>های بالینی مشاهده شود. هدف از این مطالعه ساخت کنترل داخلی جهت تشخیص اختصاصی یرسنیا پستیس می<span dir="LTR">‌</span>باشد.</p> <p dir="RTL"><strong>روش کار:</strong> در این پژوهش، پرایمرهای تشخیصی بر اساس ناحیه حفاظت شده<span dir="LTR">‌</span>ای از ژن<span dir="LTR">‌</span>های <span dir="LTR">caf</span>1 و <span dir="LTR">pla</span> توسط نرم افزار <span dir="LTR">Allele</span> <span dir="LTR">ID</span> 7.6 طراحی گشت. پرایمرهای هیبرید برای کنترل داخلی با استفاده از توالی ژن <span dir="LTR">AOX</span>1 مخمر پیکیا پاستوریس و ژن هدف طراحی شد. واکنش <span dir="LTR">PCR</span> بر روی <span dir="LTR">DNA</span> ژنومیک یرسینیا پستیس انجام گشت. محصول آن جهت ساخت کنترل داخلی در وکتور <span dir="LTR">pTZ</span>57<span dir="LTR">R</span>/<span dir="LTR">T</span> قرار گرفت. سپس، عملکرد کنترل داخلی توسط پرایمرهای تشخیصی مورد بررسی قرار گرفت.</p> <p dir="RTL"><strong>یافته</strong><strong><span dir="LTR">‌</span></strong><strong>ها:</strong> در الکتروفورز محصول <span dir="LTR">PCR</span> ژن<span dir="LTR">‌</span>های <span dir="LTR">caf</span>1 و <span dir="LTR">pla</span> به ترتیب باندهایی به طول 117 و 136 جفت باز و نتیجه تکثیر کنترل داخلی <span dir="LTR">caf</span>1-<span dir="LTR">IC</span> و <span dir="LTR">pla-IC</span> به ترتیب قطعاتی با طول 227 و 250 جفت باز&nbsp; رویت گردید، بنابراین محصول کنترل داخلی از نظر اندزه اختلاف مناسبی با محصول ژن<span dir="LTR">‌</span>های هدف دارا می<span dir="LTR">‌</span>باشد.</p> <p dir="RTL"><strong>نتیجه</strong><strong><span dir="LTR">‌</span></strong><strong>گیری:</strong> نتایج نشان داد کنترل مثبت داخلی ابزاری مؤثر برای جلوگیری از نتایج منفی کاذب و تأیید صحت نتایج می<span dir="LTR">‌</span>باشد.</p> <p dir="RTL"><strong>واژگان کلیدی:</strong> یرسینیا پستیس، طاعون، <span dir="LTR">PCR</span>، کنترل داخلی</p> <p><strong>Introduction:</strong> Yersinia pestis, a Gram-negative, non-motile and Slow growth bacterium belonging to the Enterobacteriaceae family, yersinia pestis is the causative agent of plague. It has been classified by CDC in group A of bioterrorism agents due to its high morbidity and mortality and easy person to person dissemination. In spite of<br> sensitivity and High accuracy of PCR, false negative results can occur due to the presence of inhibitors in clinical sample. The aim of this study was to plan an internal control system for the specific detection of Y.pestis.</p> <p></p> <p><strong>Methods: </strong>In this study, The diagnostic primers for the F1 capsule antigen gene (caf1) and the plasminogen activator gene (pla) were designed using Allele ID 7.6 software. our target region was a conserved fragment in the pla and caf1 genes of Y. pestis. The composit primers for IC were designed using Pichia pastoris AOX1 gene sequences and target gene. The PCR experiment was performed on genomic DNA of Y.pestis. The product was cloned in the<br> pTZ57R/T vector to construct a internal control. Then, the internal control function was evaluated By using diagnostic primers.</p> <p></p> <p><strong>Results: </strong>The PCR products of the pla and caf1 genes were 136bp and 117bp respectively on electrophoresis gel and length of IPC were 225bp and 227bp respectively, so there was a significant different between their size.</p> <p></p> <p><strong>Conclusion: </strong>The results indicate that the IC effective tool for avoid false negative results and confirm the results.</p> <p></p> <p><strong>Keywords:</strong> Yersinia pestis, plague, PCR, internal control</p> 0 0 http://jmciri.ir/browse.php?a_code=A-10-1-2073&slc_lang=fa&sid=1